實(shí)驗(yàn)介紹

物體識(shí)別試驗(yàn)(ORT)又稱(chēng)新型物體識(shí)別試驗(yàn)(NOR)，是檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶不同階段的一種相對(duì)快速有效的手段。*初由Ennaceur和Delacour在1988年描述，主要用于大鼠。然而，從那時(shí)起，它已成功地適用于小鼠。該測(cè)試只依賴(lài)于三個(gè)階段:一個(gè)習(xí)慣化階段，一個(gè)培訓(xùn)階段和一個(gè)測(cè)試階段。訓(xùn)練僅僅涉及對(duì)兩個(gè)相同物體的視覺(jué)探索，而測(cè)試階段則涉及用一個(gè)新的物體替換先前探索過(guò)的物體。因?yàn)閲X動(dòng)物有一種天生的對(duì)新奇事物的偏好，一只記得熟悉的物體的嚙齒動(dòng)物會(huì)花更多的時(shí)間探索新奇的物體。

與其他嚙齒動(dòng)物記憶測(cè)試相比，ORT的主要優(yōu)勢(shì)在于它依靠嚙齒動(dòng)物的自然傾向來(lái)探索新奇事物。因此，不需要大量的培訓(xùn)課程或任何積極或消極的強(qiáng)化來(lái)激勵(lì)行為。這意味著相對(duì)于其他測(cè)試，ORT的壓力要小得多，并且比其他常用的記憶測(cè)試(如Morris水迷宮或Barnes迷宮)需要的運(yùn)行時(shí)間短得多，這兩種測(cè)試都需要一周或更長(zhǎng)時(shí)間。因此，口服體液補(bǔ)充療法的條件與研究人類(lèi)認(rèn)知所用的條件更相似，這增加了該試驗(yàn)相對(duì)于許多其他嚙齒動(dòng)物記憶試驗(yàn)的生態(tài)有效性。

同樣，由于ORT是一項(xiàng)簡(jiǎn)單的視覺(jué)回憶任務(wù)，因此它已成功地適用于包括人類(lèi)和非人靈長(zhǎng)類(lèi)在內(nèi)的許多物種，以評(píng)估陳述性記憶的不同種間方面。*后，可以很容易地修改ORT，以檢查學(xué)習(xí)和記憶的不同階段(即獲得、鞏固或回憶)，評(píng)估不同類(lèi)型的記憶(如空間記憶)，或評(píng)估不同的記憶保持間隔(即短期記憶與長(zhǎng)期記憶)。

如何選擇合適的物體？

• 選擇不同的物體，以便于動(dòng)物識(shí)別，但具有相似的復(fù)雜程度(紋理、形狀、顏色模式和亮度等)。以*大程度地減少任何可能影響結(jié)果的潛在誘發(fā)的物體偏好。 

• 使用與老鼠大小接近或稍大一點(diǎn)的物體來(lái)鼓勵(lì)探索(圖1)。為了減少誘發(fā)的偏好，確保小鼠能夠在兩個(gè)物體上或兩個(gè)物體都不能攀登，盡管攀登物體的能力可能會(huì)增加探索的興趣(僅僅坐在物體上的時(shí)間不計(jì)入探索時(shí)間)。

• 選擇不同的物體，以便于動(dòng)物識(shí)別，但具有相似的復(fù)雜程度(紋理、形狀、顏色模式和亮度等)。以*大程度地減少任何可能影響結(jié)果的潛在誘發(fā)的物體偏好。 

• 使用與老鼠大小接近或稍大一點(diǎn)的物體來(lái)鼓勵(lì)探索(圖1)。為了減少誘發(fā)的偏好，確保小鼠能夠在兩個(gè)物體上或兩個(gè)物體都不能攀登，盡管攀登物體的能力可能會(huì)增加探索的興趣(僅僅坐在物體上的時(shí)間不計(jì)入探索時(shí)間)。

• 每個(gè)物體至少有2個(gè)相同的。為了在測(cè)試過(guò)程中*大限度地減少潛在的氣味線(xiàn)索，事實(shí)上每個(gè)物體建議要有3個(gè)，一個(gè)用于訓(xùn)練，一個(gè)用于測(cè)試，一個(gè)用于更換除味。
  

• 使用由不易碎材料制成的物體，因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中由于損壞而丟失物體可能會(huì)干擾測(cè)試的連續(xù)性，并可能對(duì)動(dòng)物造成傷害或傷害。

• 在使用前和使用之間徹底清潔物體。

• 每個(gè)物體至少有2個(gè)相同的。為了在測(cè)試過(guò)程中*大限度地減少潛在的氣味線(xiàn)索，事實(shí)上每個(gè)物體建議要有3個(gè)，一個(gè)用于訓(xùn)練，一個(gè)用于測(cè)試，一個(gè)用于更換除味。
  

• 使用由不易碎材料制成的物體，因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中由于損壞而丟失物體可能會(huì)干擾測(cè)試的連續(xù)性，并可能對(duì)動(dòng)物造成傷害或傷害。

• 在使用前和使用之間徹底清潔物體。

實(shí)驗(yàn)光線(xiàn)

為了盡量減少明亮照明的壓力，請(qǐng)使用漫反射、低照明，迷宮中心的照明度約為 20 勒克斯。使用類(lèi)似于常規(guī)住房條件的溫度和濕度。如果將老鼠從一個(gè)房間搬到另一個(gè)房間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)?jiān)诿刻焓褂们白尷鲜筮m應(yīng)新房間至少 1 小時(shí)。

實(shí)驗(yàn)預(yù)處理

在訓(xùn)練前將老鼠處理好。由于該試驗(yàn)依賴(lài)于嚙齒動(dòng)物探索新奇事物的自然傾向，因此可減少處理過(guò)程中可能會(huì)干擾其探索競(jìng)技場(chǎng)以及隨后探索物體的欲望的任何壓力或焦慮。理想情況下，每天處理小鼠1 - 2次，至少1分鐘，試驗(yàn)前1-2周。

實(shí)驗(yàn)步驟

• 在訓(xùn)練日，在對(duì)角線(xiàn)上放置 2 個(gè)相同的物體（即一個(gè)在 NW 角，一個(gè)在 SE 角）。如果物體太輕并且可以被老鼠移動(dòng)，需要將它們固定在地板上。

• 在測(cè)試日，使用每個(gè)物體的第三個(gè)副本，將一個(gè)熟悉的物體和一個(gè)新奇的物體放置在與訓(xùn)練日相同的對(duì)角線(xiàn)上(圖2)。

Tip：對(duì)于實(shí)驗(yàn)測(cè)試箱，使用由白色或黑色無(wú)孔塑料制成的方形室(約40 cm x 40 cm x 40 cm)，與小鼠的顏色形成對(duì)比。或者，使用圓形開(kāi)放場(chǎng)平衡每組物體的使用，這樣每一個(gè)物體都可以作為一個(gè)熟悉的物體和一個(gè)新奇的物體使用。此外，平衡新物體的位置到競(jìng)技場(chǎng)的4個(gè)角落。確保記錄哪只對(duì)角線(xiàn)用于哪只動(dòng)物，以便訓(xùn)練日使用的對(duì)角線(xiàn)與測(cè)試日每只小鼠使用的對(duì)角線(xiàn)相同。

• 將相機(jī)直接放在設(shè)備的上方，以獲得*佳的探索視野。可使用具有鼻點(diǎn)檢測(cè)功能的VisuTrack軟件進(jìn)行準(zhǔn)確分析。如果使用軟件，請(qǐng)?jiān)陂_(kāi)始之前捕獲已放置對(duì)象的背景圖像。在軟件中，將探索區(qū)域設(shè)置為對(duì)象周?chē)蠹s 2-3 cm。

• 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，請(qǐng)確保實(shí)驗(yàn)者距離實(shí)驗(yàn)箱1米以上，并且老鼠不可見(jiàn)。注意：任何時(shí)候老鼠坐在物體上而沒(méi)有主動(dòng)的觸須掃描或嗅探都不算作探索時(shí)間。

• 在訓(xùn)練(T1)和測(cè)試(T2)期間，計(jì)算每個(gè)會(huì)話(huà)中兩個(gè)對(duì)象的總探索時(shí)間(e1和e2)。大多數(shù)小鼠應(yīng)在5分鐘前達(dá)到兩個(gè)物體20秒的*小探測(cè)總數(shù)。

• 對(duì)于探索性低且不符合此*低標(biāo)準(zhǔn)的小鼠品系，將T1和T2時(shí)間延長(zhǎng)至10 min，延長(zhǎng)5 min，如試點(diǎn)測(cè)試期間所觀察到的。 

• 對(duì)行為評(píng)分5分鐘或超過(guò)5分鐘，直至達(dá)到20秒的*低標(biāo)準(zhǔn)。 

• 如果小鼠在10分鐘內(nèi)對(duì)T1或T2兩個(gè)物體的探索未達(dá)到20秒的*小值，則排除在分析之外，因?yàn)闊o(wú)法確認(rèn)它們是否花費(fèi)了足夠的探索時(shí)間來(lái)學(xué)習(xí)/辨別。

動(dòng)物行為分析軟件：

1. VisuTrack軟件

2. SuperMaze軟件

3. FishTrack斑馬魚(yú)分析軟件

動(dòng)物行為儀器：

1. 自身給藥、條件恐懼、斯金納、震驚反射（PPI）、跑步機(jī)、各類(lèi)經(jīng)典迷宮等

2、動(dòng)物抓撓分析儀、動(dòng)物震顫行為分析儀、動(dòng)物捕食行為分析儀

3、動(dòng)物主動(dòng)步態(tài)分析、動(dòng)物被動(dòng)步態(tài)分析、動(dòng)物自由步態(tài)分析（內(nèi)測(cè)中）

4、睡眠剝奪儀、體溫維持儀、智能熱板儀、轉(zhuǎn)棒疲勞儀、鼠尾光照測(cè)痛儀等

神經(jīng)電生理：

1、光遺傳、無(wú)線(xiàn)光遺傳

2、光纖記錄系統(tǒng)（單通道、多通道）

3、電生理信號(hào)采集系統(tǒng)（腦電、肌電等）